細胞名稱Anglne（人卵巢癌細胞）

　　種屬人

　　年齡（性別）

　　組織來源

　　生長特性貼壁

　　細胞形態上皮細胞樣

　　背景描述Anglne細胞是由德國學者建系；Anglne細胞主要用于卵巢癌的病理學研究，抗腫瘤藥物篩選。研究證明，Anglne細胞為貼壁生長，較COC1細胞系培養方便。

　　生長培養基DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S

　　培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

　　Anglne（人卵巢癌細胞）用途：僅供科研使用。

　　細胞接收后的處理：

　　1）收到細胞后，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

　　2）在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，最hao在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

　　3）觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

　　4）貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

　　5）懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基）。

　　6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第1次傳代建議1：2傳代。

　　Anglne（人卵巢癌細胞）培養步驟

　　一．Anglne（人卵巢癌細胞）培養基及培養凍存條件準備：

　　1）DMEM+10%FBS+1%P/S

　　2）培養條件：Atmosphere:Air,95%;CO2,5%，Temperature:37℃。

　　3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　4）Medium Renewal：every 2 to 3 days

　　二．細胞處理：

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。